Днк-диагностика Opisthorchis felineus по ITS2-последовательностям в промежуточных хозяевах – моллюсках-битиниях

Abstract

В результате проведенных исследований нами были разработаны и апробированы технологии видоспецифичной ДНК-диагностики для выявления описторхид в моллюсках-битиниях речных водоемов Гомельщины. Установлено, что оптимальными методами выделения геномной ДНК O. felineus являются метод фенольной экстракции и использование ионно-обменной смолы. Подобраны праймеры для амплификации ITS2-спейсера, позволяющего проводить видовую идентификацию описторхид. Определены параметры ПЦР-анализа, позволяющие получать ампликон ITS2 для видоспецифической идентификации описторха в тканях промежуточного хозяина – моллюска-битинии. Показано, что разработанные ДНК-технологии позволяют оценить степень зараженности битиний O. felineus. We developed and approved technologies of species-specific DNA diagnostics for detection opisthorchiids in snails – bithynias the river reservoirs of Gomel region as a result of our researches. It was established, that optimum methods extraction genomic DNA O. felineus are: a phenol extraction method and using of ionic-exchange pitch. Was chose primers for amplification ITS2 spacer, allowing to spend specific identification opisthorchiids. PCR-analysis parametres, allowing to receive amplification products of ITS2 for species-specific identification opisthorchiids in tissue of the intermediate owner – a snail – bithynia were defined. It was shown, that the developed DNA-technologies allow to estimate degree of contaminations bithynias O. felineus.